产品货号：
SNM008
中文名称：
细胞色素C氧化酶活性测试盒(生化法)
英文名称：
Cytochrome C oxidase assay kit
产品规格：
20T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒用于各种组织(动物、人体、昆虫等)裂解悬液中细胞色素C氧化酶的活性检测。本产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
细胞色素C氧化酶(Cytochrome C oxidase)存在于真核生物的细胞线粒体上，主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。基于底物还原型细胞色素C(reduced cytochrome C)，受到细胞色素C氧化酶的催化，转化为氧化型细胞色素C(oxidized cytochrome C)，在分光光度仪下，出现吸光值的变化(550nm波长)，由此定量测定细胞色素C氧化酶的活性。细胞色素C氧化酶反应系统为：
保存：收到后按试剂标签温度分开保存，有效期6月。
一、样品准备
二、测读准备
三、背景对照测定
四、样品测定
五、计算样品活性
[(样品读数－背景读数)×1(体系容量)×样品稀释倍数]÷[0.1(样品容量)×21.84(毫摩尔吸光系数×1(反
应时间，分钟)]＝单位/ml÷(样品蛋白浓度)mg/mL＝单位/mg
单位＝微摩尔细胞色素C/分钟
相关搜索：细胞色素C氧化酶活性测试盒(生化法)，细胞色素C氧化酶活性检测试剂盒，Cytochrome C oxidase assay kit
细胞色素C氧化酶(Cytochrome C oxidase)存在于真核生物的细胞线粒体上，主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。基于底物还原型细胞色素C(reduced cytochrome C)，受到细胞色素C氧化酶的催化，转化为氧化型细胞色素C(oxidized cytochrome C)，在分光光度仪下，出现吸光值的变化(550nm波长)，由此定量测定细胞色素C氧化酶的活性。细胞色素C氧化酶反应系统为：
| 组分 | 规格 | 保存条件 |
| 清理液(Reagent A) | 60mL | 4℃ |
| 裂解液(Reagent B) | 10mL | -20℃ |
| 缓冲液(Reagent C) | 20mL | 4℃ |
| 反应液(Reagent D) | 2mL | -20℃，避光 |
| 稀释液(Reagent E) | 1mL | 4℃ |
| 稳定液A(Reagent F1) | 1管 | -20℃ |
| 稳定液B(Reagent F2) | 250μL | -20℃ |
保存：收到后按试剂标签温度分开保存，有效期6月。
- 5mL离心管：用于反应液和样品制备的容器；
- 15mL锥形离心管：用于样品制备的容器；
- 微型台式离心机：用于样品操作；
- 比色皿：用于比色的容器；
- 分光光度仪：用于比色分析。
- 本产品为20次操作，包括背景对照。
- 操作时，须戴手套。
- 样品制备中忌用DTT和巯基乙醇等处理。
- 每增加1个样品，增加反应工作液为：反应液(Reagent D)100μL ＋稳定工作液3μL，以此类推。配制反应工作液时，须根据样本数量配制实际工作液容量。
- 系统操作过程中，背景测定只需1次。
- 分光光度计波长严格设置在550nm，误差10nm将不产生信号。
- 加样后3秒内进行比色测定。
- 比色测定后，比色皿须清洗彻底。
- 比色皿背景空对照0秒读数通常大于0.2为理想状态；建议使用比色皿测定。
- 背景空对照的正常读数差值(0秒～60秒)通常为0.001至0.005(正负即可)。
- 样品0秒读数通常和背景空对照0秒读数一致。
- 样本测定60秒读数低于0秒读数表明具有酶活性。
- 酶活性单位浓度定义：在25℃室温下，pH7.0的情况下，每单位酶在单位时间内(每分钟)氧化1微摩尔的细胞色素C。
- 建议待测样本总蛋白浓度为50μg/100μL；如果样本酶活性过低或过高，即60秒读数不变或为零，则可以增加或降低样本量(本公司提供考马斯亮蓝蛋白质浓度定量试剂盒，货号：SNM152)。
一、样品准备
- 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量。
- (选择步骤)放进预冷的15mL锥形离心管。
- (选择步骤)加入适量的(500毫克组织需要3mL)清理液(Reagent A)清洗1次。
- 移入到一个液氮冻存管。
- 即刻放进液氮罐过夜。
- 次日从液氮罐里取出，即刻(最快速度)用研磨棒碾碎组织成粉末状(注意：切莫使组织冻融)。
- 放进一个15mL锥形离心管。
- 加入预冷的500μL裂解液(Reagent B)。
- 转移到预冷的1.5mL离心管。
- 强力涡旋震荡30秒，充分混匀。
- 置于冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒(注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用)。
- 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g(或13000RPM)。
- 小心移取500μL上清液到新的预冷的1.5mL离心管。
- 移取10μL进行蛋白定量检测(注意：建议使用考马斯亮蓝蛋白质浓度定量试剂盒，货号：SNM152)。
- 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作。
二、测读准备
- 准备好待测样品，置于冰槽里融化。
- 设定好分光光度仪：温度25℃，波长550nm，间隔10秒，测读7次(共60秒)，并置零或设置0秒和60秒各测读1次。
- 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的稳定液B(Reagent F2)置入冰槽里融化，然后移出250μL到稳定液A(Reagent F1)管里，混匀后，标记为稳定工作液，置于冰槽里备用(注意，用完后即刻放回－20℃冰箱里)。然后将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液(Reagent D)置入冰槽里融化，然后移出100μL到新的1.5mL离心管，加入3μL稳定工作液，轻柔混匀后，室温下避光静置至少15分钟(可见颜色变化)，置于冰槽里，标记为反应工作液(注意：参见注意事项4)，放在暗室里备用。然后进行下列操作。
- 缓冲液(Reagent C)室温下均衡温度。
三、背景对照测定
- 移取800μL缓冲液(Reagent C)到新的1mL比色皿。
- 加入100μL稀释液(Reagent E)。
- 上下倾倒数次，混匀。
- 室温下孵育3分钟。
- 放进分光光度仪，置零。
- 取出比色皿，加入100μL含有反应液(Reagent D)和稳定液(Reagent F)的反应工作液。
- 上下倾倒数次，混匀。
- 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照(0秒读数－60秒读数)，正常读数差值为0.001至0.005。
四、样品测定
- 移取800μL缓冲液(Reagent C)到新的比色皿。
- 加入100μL待测样品(注意：建议总量50μg总蛋白，且样品需澄清)。
- 上下倾倒数次，混匀。
- 室温下孵育3分钟。
- 放进分光光度仪，置零。
- 取出比色皿，加入100μL含有反应液(Reagent D)和稳定液(Reagent F)的反应工作液。
- 即刻上下倾倒数次，混匀(限定在3秒之内)。
- 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数(0秒读数－60秒读数)，通常活性读数差值为正数。
五、计算样品活性
[(样品读数－背景读数)×1(体系容量)×样品稀释倍数]÷[0.1(样品容量)×21.84(毫摩尔吸光系数×1(反
应时间，分钟)]＝单位/ml÷(样品蛋白浓度)mg/mL＝单位/mg
单位＝微摩尔细胞色素C/分钟
相关搜索：细胞色素C氧化酶活性测试盒(生化法)，细胞色素C氧化酶活性检测试剂盒，Cytochrome C oxidase assay kit